Спектрофотометрическое определение содержания суммы полисахаридов в траве фиалки

Введение. Гармонизация фармакопейных требований в рамках Евразийского экономического союза (ЕАЭС) стимулирует унификацию подходов к анализу лекарственного растительного сырья. Трава фиалки, заготавливаемая от растений Viola arvensis Murr. и Viola tricolor L., содержит комплекс биологически активных веществ, включая полисахариды. Действующая нормативная документация (ФС.2.5.0044.15 Государственной фармакопеи XIV издания) предусматривает гравиметрическое определение полисахаридов, однако данный метод имеет ряд существенных аналитических недостатков. В качестве альтернативы предложен спектрофотометрический метод с пикриновой кислотой, являющийся официнальным для листьев мать-и-мачехи.

Цель. Оценка возможности применения спектрофотометрической методики с пикриновой кислотой для количественного определения суммы полисахаридов в траве фиалки и сопоставление ее метрологических характеристик с результатами гравиметрического анализа.

Материалы и методы. Объектами исследования служили образцы травы фиалки: собственной заготовки (Ленинградская область) и два промышленных образца. За основу была взята фармакопейная методика анализа листьев мать-и-мачехи (ФС.2.5.0027.15). Проведена оптимизация условий экстракции и гидролиза, а также верификация методики для травы фиалки по показателям «специфичность», «линейность» и «прецизионность» (повторяемость). Гравиметрическое определение полисахаридов проводили по методике ФС.2.5.0044.15.

Результаты и обсуждение. Установлены оптимальные параметры пробоподготовки для травы фиалки: степень измельчения сырья — частицы, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм; гидромодуль «сырье : экстрагент» — 1 : 40; продолжительность кислотного гидролиза — 2 ч. Специфичность подтверждена совпадением максимума поглощения продуктов реакции при длине волны 470 нм для стандартного образца глюкозы и извлечения из сырья фиалки. Методика линейна в аналитическом диапазоне (r ≥ 0,995) и обладает высокой сходимостью в условиях повторяемости (RSD = 1,2 %). Гравиметрический метод показал систематически завышенные значения содержания полисахаридов во всех образцах и большую вариабельность, обусловленную соосаждением сопутствующих биополимеров.

Заключение. Спектрофотометрическая методика с пикриновой кислотой пригодна для стандартизации травы фиалки по содержанию суммы полисахаридов после оптимизации условий экстракции. Полученные данные обосновывают возможность унификации аналитических подходов к контролю углеводного комплекса в различных видах лекарственного растительного сырья.

1. Шахназаров Б. А. Фармакопея ЕАЭС как гармонизирующая основа требований к качеству лекарственных средств в ЕАЭС и за его пределами. Актуальные проблемы российского права. 2022;17(11):183–193. https://doi.org/10.17803/1994-1471.2022.144.11.183-193

2. Яруткин А. В., Багирова В. Л. Государственная фармакопея XV издания: приоритетные направления развития. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2024;14(5):572–579. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2024-14-5-572-579

3. Тернинко И. И., Нгуен Т. Х. И. Критерии стандартизации лекарственного растительного сырья в фармакопеях стран ЕАЭС и ЕС. Фармация. 2016;65(8):5–8.

4. Петрова Н. В., Медведева Н. А. Компонентный состав и биологическая активность видов рода Viola (Violaceae) флоры России. Химия растительного сырья. 2020;(2):19–45. https://doi.org/10.14258/jcprm.2020026305

5. Toiu A., Oniga I., Vlase L. Determination of flavonoids from Viola arvensis and V. declinata (Violaceae). Hop and Medicinal Plants. 2017;25(1–2):125–130. https://doi.org/10.15835/hpm.v25i1-2.12886

6. Кахраманова С. Д., Боков Д. О., Самылина И. А. Количественное определение полисахаридов в лекарственном растительном сырье. Фармация. 2020;69(8):5–12. https://doi.org/10.29296/25419218-2020-08-01

7. Ровкина К. И., Кривощеков С. В., Гурьев А. М., Белоусов М. В. Валидация спектрофотометрической методики количественного определения полисахаридов березы. Медицинский вестник Башкортостана. 2019;14(2):48–51.

8. Никулин А. В., Терещенко Г. С., Потанина О. Г. Определение суммы полисахаридов и свободных сахаров в листьях мать-и-мачехи методом УФ-спектрофотометрии. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2016;19(9):3–7.

9. Тринеева О. В., Сливкин А. И. Определение суммы полисахаридов и простых сахаров в листьях крапивы двудомной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2017;(1):164–169.

10. Тринеева О. В., Казьмина М. А., Сливкин А. И. Разработка и валидация методики определения суммы свободных и связанных простых сахаров в плодах облепихи крушиновидной. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2017;(1):138–143.

11. Тринеева О. В., Сливкин А. И. Изучение углеводного комплекса плодов облепихи крушиновидной различными методами. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2020;(2):91–98.

12. Гудкова А. А., Шестакова Г. Ю., Сливкин А. И., Чистякова А. С., Агафонов В. А., Чавро П. В. Изучение углеводного состава синюхи голубой (Polemonium caeruleum L.). Химия растительного сырья. 2021;(3):107–114. https://doi.org/10.14258/jcprm.2021038795

13. Нестерова О. В., Сулейманова Ф. Ш. Количественное определение полисахаридов в траве золотарника канадского спектрофотометрическим и гравиметрическим методами. В сб.: IV Международный научно-исследовательский конкурс «Достижения вузовской науки». Пенза: МЦНС «Наука и просвещение»; 2018. С. 192–194.